中科西部细胞:什么是脐带间充质干细胞 ?

2022-09-05 17:17:44 97

脐带间充质干细胞疾病的原理:

1. 替代和修复死亡和受损伤的细胞。

2.激活休眠和处于抑制状态的细胞:

3. 旁分泌作用(分泌神经营养因子、抗凋亡因子等):

免疫调控机制:

4.促进细胞间电能力、电传导的恢复(如间充质干细胞分泌连接蛋白帮助细胞间连接、促进离子通道的开放等)。

干细胞优势:

1.范围广阔,无任何毒性;

2.避免排斥,无须深入了解疾病的致病机理;

3.材料来源充足。

干细胞技术的应用前景:

干细胞技术可传统药物或者手术方式难以的重大疑难疾病,免除病人承受较大痛苦:成功应用于再生医学美容,在未来生物发展中具更广阔的运用前景。

操作原则:

1.要在无菌条件下,如生物安全柜或洁净工作台处理该产品;

2.操作人员在操作过程中注意穿戴防护服;

3.我们建议细胞的接种密度为25-4.0x104cells/cm2,具体数量请根据细胞状态加以调整。

复苏和培养:

脐带间质干细胞的复苏和培养:

1.准备好37℃水浴。

2.准备好人脐带间质干细胞完全培养基,温育到37℃。

3.在15 mL离心管中加入9 mL的人脐带间质干细胞完全培养基。

4.从液氧罐口取出冻存的人脐带间质干细胞,立即放入-80℃冰箱(目的是让进入冻存管的液氮稍加挥发)。

5.在-80℃放置2-3 min后,取出冻存细胞,将冻存管迅速放入37℃温水中,快速晃动使管中内含物尽快融化。仔细观察,待冻存管内含物完全融化后取出。

6.用70%-75%酒精消毒冻存管口的外壁。

7.在超净台中打开冻存管,用吸管将细胞冻存悬液移入装有9 mL完全培养基的15mL离心管中。在这一过程请尽可能避免产生气泡。

传代:

脐带间质干细胞的传代:

1.将人脐带间质干细胞完全培养基、PBS、0.25%EDTA预热至37℃。。 2.吸去培养液。

3.用PBS(T25培养瓶加入约3 mL,T75培养瓶加入约6 mL)洗涤细胞2-3次。注意不要损害贴壁的细胞。

4.吸去PBS。

5.加入0.25%EDTA(T25加入约1mL,T75加入约2-3mL)。轻轻旋转,使EDTA覆盖细胞表面,消

化,显微镜下观察到约70%-80%左右的细胞变圆后,用手轻拍培养器皿的壁使细胞脱壁。

6.当看到明显的细胞脱落下来,立即加入预热的完全培养基(T25培养瓶加入约3m,T75培养瓶加

入约6 mL)终止消化。

7.用吸管吸取液体,反复吹打培养器皿底壁,使细胞彻底脱离器皿底壁。吹打时动作不宜太猛,

尽量避免产生气泡。

8.将细胞悬液转移到15 mL的离心管中。

9. 250 g,离心5min。

10,小心弃去上清液。

11.加入2 mL完全培养基重悬细胞。吹打时动作不宜太猛,尽量避免产生气泡。

12.对细胞进行台盼蓝染色计数活细胞数量。

13.按照2.5-4.0x104个活细胞/cm2的密度来接种细胞。

14.加入适量的人脐带间质干细胞完全培养基,轻轻摇晃细胞培养器皿,使细胞均匀分布。

15.把细胞放入37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。

换液:

脐带间质干细胞的换液:

1.传代后发现有很多死细胞,应该予以换液。

2.当人脐带间质干细胞的完全培养基pH值变酸时(培养液的颜色变黄),而且此时细胞仍未可以传

代,则应该予以换液。一般来说,人脐带间质干细胞的换液间隔为2-3天。

(1)倾斜培养瓶,用移液管吸掉7mL培养上清液。

说明:吸掉培养上清液时,尽量不吸走未贴壁的组织块。

(2)加入7mL完全培养基,摇匀。

冻存:

脐带间质干细胞的冻存:

1.待细胞生长至可传代的密度,即可消化准备冻存。

2.细胞的消化。

3.对细胞进行计数。

4.消化后的细胞悬液经250 g离心5 min。

5.小心弃去上清。

6.用10%DMSO冻存液重悬细胞,并使细胞的密度为1x106个活细胞/mL(或希望达到的细胞密度)。

7.把细胞分装到冻存管(需提前做好标记或贴上标签)中,旋紧冻存管盖。

8.将封好的冻存管放进程序降温盒,再放入-80℃冰箱。

9.24 h后将细胞转移至液氮进行长期保存。

参考文献:

Hwai-Shi Wang,Shih-Chieh Hung,and Shu-Ting Peng(2004)Mesenchymal Stem Cells

in the Wharton's Jelly of the Human Umbilical Cord.Stem Cells 22: 1330-1337

Rahul Sarugaser, David Lickorish, and Dolores Baksh(2005) Human Umbilical Cord

Perivascular (HUCPV)Cells: A Source of Mesenchymal Progenitors.Stem Cells 23:

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SercinKarahuseyinoglu,OzgurCinar, and EmineKilic.(2007)Biologyof Stem Cells in Human Umbilical Cord Stroma: In Situ and In Vitro Surveys.Stem Cells 25: 319-331

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